緩沖液(Buffer solution)通常是由「弱酸及其共軛堿」或「弱堿及其共軛酸」緩沖對所組成的溶液,能夠在加入一定量其他物質時減緩pH的改變。下面就具體來了解一下關于緩沖液的相關知識。
什么是緩沖液
緩沖液是一種含有共軛酸/堿對的水溶液。 緩沖液的pH值范圍根據其pKa值決定。該pKa值定義為50%的分子為酸式結構,50%為堿式結構時的pH值。關于緩沖液的一個常規原則是,其pH值應保證在pKa值左右1個pH值單位范圍內,從而保證其具有良好的緩沖能力。如此可以保證同時有足夠的以酸式結構和堿式結構存在的分子在加入H+或者OH-時可以將它們中和。這樣,緩沖液就可以防止pH變化導致的蛋白質穩定性改變。
好的緩沖液須具備的特點
1、水溶性
2、化學穩定性
3、在所需pH范圍內良好的緩沖能力
4、與分析和實驗應用條件具有良好的兼容性
5、與其他溶質具有良好的兼容性
很多物質都可以用于生物緩沖液。常使用的緩沖液成分通常具有接近中性的pKa值,可在生理pH值范圍左右使用。表1列出了4種常用的生物緩沖液、各自的pH值應用范圍及各自可能對蛋白質純化過程產生影響的優缺點。為保證足夠的緩沖能力,這些緩沖液的濃度通常為25mM。
蛋白質純化中常用的生物緩沖液。緩沖液在一定pH值范圍內可保持它們的緩沖能力,部分緩沖液成分會對某些層析過程或者分析實驗造成影響。
緩沖溶液的作用
緩沖溶液的作用是在有限的范圍內調整溶液的pH值使待測溶液的酸度符合分析方法所規定的范圍,例如,苯酚在堿性介質及鐵氰hua鉀存在下,可與4-氨基安替比林反應生成橙紅色的安替比林染料,為了防止芳香胺類的干擾以pH在10士0.2時為適宜。為此,就需要在待測溶液中加入氨一氯化錢緩沖溶液調整和控制待測溶液的pH為10.0士0.2。
在實際工作中有些分析人員由于不大了解緩沖溶液的作用機理,當所配制和使用的緩沖溶液與規定的數值不相符時,為使緩沖溶液達到要求,就用鹽酸或氫氧化鈉等強酸、強堿進行調節,以為這樣做可以使緩沖溶液盡快達到所需要的pH值,然而,結果卻適得其反,這樣的溶液pH值雖然調對了,可是它的緩沖體系卻被破壞了,作用也就失去了,緩沖溶液一般都是由弱酸及其弱酸鹽或是弱堿及其弱堿鹽組成的一對共軛體。